Punnitaan 3 miligrams peptidin asteikolla . Aseta sesentrifugiputkeen . Lisätään noin 0,3 ml vettä , 0,3 ml Sanger reagenssi ja 0,075 ml : lla natriumbikarbonaattia .
2
Annetaan sentrifugiputkeen inkuboitua huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan . Inkubaation aikana , ravista putki varovasti, jotta seoksen erottamiseksi . Tarkista liuoksen pH 15 minuutin välein pH-paperilla . PH tulisi pitää yli 9 . Jos se alkaa pudota, lisätä pieni määrä natriumbikarbonaattia (noin yksi tippa kanssaPasteur-pipetillä ) .
3
Inkuboinnin jälkeen lisätään 1,5 ml vettä ja yhtä suuri määrä eetteriä . Anna liuoksen erottamiseksi kerroksiksi . Saatat joutua sentrifugoidaan sen erottamiseksi . Poistaeetterikerros (top , keltainen kerros ) pipetillä ja hävitä se .
4
SäädäpH alas 1,0 lisäämällä hitaasti suolahappoa . Lisäähieman happoa kerrallaan , sekoita varovasti , tarkistapH pH-paperilla . Kokonaan, se olisi vaadittava noin 0,15 ml happoa . Jos pH laskee alle 1,0 , lisätään pieni määrä ( enintääntippa) natriumbikarbonaattia .
5
Lisää 3 ml: aan eetteriä . Seoksen annetaan erottua. Nytpintakerroksen (keltainen , eetterikerros ) sisältää oman DNP - yhdistettä . Pipetillä huolellisesti purkaa tämä kerros ja siirtää senpuhtaaseen koeputkeen . Sijoitetaan koeputki syrjään ja anna nesteen haihtua , jättäen jälkeensäkuiva , keltainen kiinteä .
6
Pese kiinteä asetonilla . Lisää 0,3 millilitraa asetonia , sekoitetaan varovasti ja poimianestettä pipetillä . Lisää 0,75 millilitraa haponkoeputkeen . Sinun peptidi on nyt merkitty ja valmis hydrolysoida ja analysoitiinkaasukromatografilla valintasi .