Harrastukset ja kiinnostuksen

Kuinka käyttää Sanger reagenssit

Sanger reagenssia käytetään auttaa määrittämäänn aminohappojen , jotka muodostavatpeptidi . Reagenssi salpa päälle - tai tag - aminohappo aivan lopussapeptidi- ketju , joka tunnetaan myös N-päähän . Peptidi voidaan sitten jaettu kappaletta ( hydrolysoidaan ) jayksittäisiä aminohappoja tutkittiin käyttämällä erilaisia ​​kromatografisia menetelmiä . Kumpi aminohappo kantaatagi onyksi lopussa . Sanger reagenssi tunnetaan myös dinitrofluoribentseeniä ( DNFB ) . Kun se on kunnolla kiinniaminohappo , se on tarkoitettu , kutenDNP - compound.Things tarvitset
Laboratoriomittakaavainen
Käsineet
suojalasit
Sentrifugoidaan
Sentrifugiputket
pasteurpipeteillä
tislattua vettä
4,2% natriumbikarbonaattiliuoksella
Sanger reagenssi ( FDNB )
pH-paperi
Dietyylieetteri
6M suolahapon
Asetoni
Test putki
Näytä enemmän Ohjeet

1

Punnitaan 3 miligrams peptidin asteikolla . Aseta sesentrifugiputkeen . Lisätään noin 0,3 ml vettä , 0,3 ml Sanger reagenssi ja 0,075 ml : lla natriumbikarbonaattia .
2

Annetaan sentrifugiputkeen inkuboitua huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan . Inkubaation aikana , ravista putki varovasti, jotta seoksen erottamiseksi . Tarkista liuoksen pH 15 minuutin välein pH-paperilla . PH tulisi pitää yli 9 . Jos se alkaa pudota, lisätä pieni määrä natriumbikarbonaattia (noin yksi tippa kanssaPasteur-pipetillä ) .
3

Inkuboinnin jälkeen lisätään 1,5 ml vettä ja yhtä suuri määrä eetteriä . Anna liuoksen erottamiseksi kerroksiksi . Saatat joutua sentrifugoidaan sen erottamiseksi . Poistaeetterikerros (top , keltainen kerros ) pipetillä ja hävitä se .
4

SäädäpH alas 1,0 lisäämällä hitaasti suolahappoa . Lisäähieman happoa kerrallaan , sekoita varovasti , tarkistapH pH-paperilla . Kokonaan, se olisi vaadittava noin 0,15 ml happoa . Jos pH laskee alle 1,0 , lisätään pieni määrä ( enintääntippa) natriumbikarbonaattia .
5

Lisää 3 ml: aan eetteriä . Seoksen annetaan erottua. Nytpintakerroksen (keltainen , eetterikerros ) sisältää oman DNP - yhdistettä . Pipetillä huolellisesti purkaa tämä kerros ja siirtää senpuhtaaseen koeputkeen . Sijoitetaan koeputki syrjään ja anna nesteen haihtua , jättäen jälkeensäkuiva , keltainen kiinteä .
6

Pese kiinteä asetonilla . Lisää 0,3 millilitraa asetonia , sekoitetaan varovasti ja poimianestettä pipetillä . Lisää 0,75 millilitraa haponkoeputkeen . Sinun peptidi on nyt merkitty ja valmis hydrolysoida ja analysoitiinkaasukromatografilla valintasi .


https://fi.htfbw.com © Harrastukset ja kiinnostuksen