Miten kalibrointi geelisuodatuskolonneja

geelisuodatuskolonneja erottamiseen käytetään proteiinien monimutkaisia ​​seoksia . Koska jokainen proteiini on ainutlaatuinen molekyylipaino , ne voidaan saada erottumaan erillisiin kerroksiin siirtämällä ne läpisuodattamalla pylvääseen, joka sisältää tasaisesti jakautuneen geelimatriisi . Oikein tunnistaa jokainen proteiini, joka on erotettu , sinun tulee kalibroidasarakkeita käyttämällä useita proteiineja, joiden molekyyli weight.Things tarvitset
Hiilihappoanhydraasin
sytokromi C
Aprotiniinia
perussuolaa
Sentrifugiputket
Ferritiini
Sentrifugoidaan
Pipet pumpata
250 ml: n mittalasiin
puskurinesteen
Tieteellinen puhdistuspyyhkeet
ruiskusäiliöstä
Näytä enemmän Ohje

1

Poistetaan putket hiilihappoanhydraasi , sytokromi C ja aprotiniinilla jääkaapista tai pakastimesta ja anna niiden lämmetä huoneenlämpöiseksi . Lisää 4 mg kutakin proteiinia sentrifugiputkeen millilitrassa geelinsuodatus sarakkeessa . Lisää 961 pl perussuolaa milligrammaa proteiinia jokaiseen sentrifugiputkeen hajottaaproteiineja . Lisää 39,2 mcl Ferritiinin millilitrassa geeliä kuhunkin putkeen ja sitten sekoitetaanpaikaksi.
2

Sammutalisuodatuspylvästä pumppu ja suljehana onsarakkeen sisäänkäynti. Kierrä , mutta eivät poista , yläosaan suodatuskolonniin . Aseta pumppuMaksimi virtaussarakkeen ja käynnistäpumppua ennenpuskurimateriaalia on laadittu pois . Pumpun pysäyttämiseksi .
3

Lisää 1 ml kutakin proteiinialisuodatuspylvästä pipetinvetäjää pumppua . Tippuaproteiinit pitkin alas kolonninkorkeus on 1 cm ja 2 cm , työ ympäri sisäreunaansarakkeessa. Salliproteiiniseos laskeutua päällegeelimatriksin .
4

Asetaulostuloletkut pumpun puhtaassa , kuivassa 250 ml: n mittalasiin . Käynnistä pumppua nopeudella 0,30 ml per minuutti ja aja proteiinejageelimatriisiin . , Kun pumppu on käynnissä, huuhteleputken sivuilla käyttäen pipetillä pumppu ja pieni määrä puskuria nestettä. Sen jälkeen, kun proteiinit on tullut täysingeelimatriksin , vähentää pumpun nopeutta 0,02 ml per minuutti ja pumppu 5 cm: 7 cm: n kerros puskuria nesteen päälle matriisin .
5

Irrota sarake korkki vesihana . Puhdistasarake korkki jasisälläsarakkeen tieteellisin puhdistuspyyhkeitä . Asennasarake korkki . Täytäpuskurisäiliön puskurilla nestettä . Kiinnitäruiskusäiliötähana ja avaa se . Käyttämällä ruiskua tehdä pieni määrä puskuria letkun läpi , ja ruiskuun . Sulje vesihana ja kiinnitä sesarakkeeseen alkuun . Avaa vesihana ja tarkista vuodot .
6

Runpylvääseen nopeudella 0,02 ml minuutissa useita päiviä , kunnesferritiini yhtye lähestyypilarin päähän . Kerää kaikkisuodatus geeli, joka pumpataan ulosmittalasiin .