Kuinka valmistautuaHanging Drop

Voit selvittää3D- rakenteenproteiinia , sinun on ensinkristallinmuotoisia sitä . Roikkuu pudota menetelmässä käytetäänpisara proteiinia sisältävää liuosta roikkuupeitelevy. Tämän alla riippuva pisara kuuluusäiliö , jossa on korkeampi suolapitoisuus kuin pudota . Ajan , vesihöyry poistuu pudota ja päätyy säiliöön , aiheuttaaproteiini kiteytyä. Kukin proteiini vaatii eri olosuhteissa ( esimerkiksi suolapitoisuuden ja pH ) , ja usein yrityksen ja erehdyksen on ainoa tapa löytääoikea conditions.Things tarvitset
Laboratoriotakki , käsineitä ja suojalaseja
Mikropipetti pipetillä tips 1 molaarista natriumkloridin 0,05 M asetaatti -puskurissa, pH 4,7
2 ml Eppendorf-putkiin ( tai vastaava)
Sentrifugi
24 - kuoppalevylle
Vacuum rasva ruisku
Silikonoidut peitinlasi
Paineilma
Pinsetit
Clay ( esimerkiksi muovailuvahasta tai vastaava)
50 mg /ml lysotsyymin 0,05 M asetaattipuskuriliuosta , pH 4,7
Näytä Enemmän Ohjeet

1

Laita lab vaihde ( takki , suojakäsineitä ja silmien suojaus ) .
2

Käytämikropipetillä lisätä 1,1 mlnatriumkloridia ( suolaa ) ja asetaattipuskuriliuosta osaksi Eppendorf-putkeen .
3

Sentrifugoidaan suljetussa Eppendorf- putkisuolaliuoksen sisällä noin viiden minuutin ajan 13000 rpm: llä. Muista sentrifugin tasapainottamiseksi asettamalla toinen Eppendorf- putkeen, joka sisälsi 1,1 ml vettä vastapäätä , ja vastapäätäsuolaliuos putki .
4

Lisää 1 mlsuolaliuostahyvin24 -kuoppaisilla levy .
5

Käytärasvalla täytetyn ruiskun sijoittaaohut kerros rasvaa ympärillevanteen tämän hyvin . Varo lisätä liian vähän tai liian paljon . Jos lisäät liikaa rasvaa ,rasva valuahyvin ja mahdollisesti pilata kokeilu . Jos käytät liian vähän ,hyvin ei ilmatiivis ja kokeilu ei toimi . Tähtää vain tarpeeksi rasvaa ettäpeittolasilla ja rasva muodostavatilmatiiviin sulun myöhemmin .
6

Rollsavi kädet tehdä neljä pieniä palloja , ja työnnä neneljä kulmaa24- kuoppalevylle. Ne toimivat kannattaa varmistaakannenlevy ei joudu kosketuksiinpeitinlasi .
7

Käytä paineilmaa puhaltaa pölyn poispeitelevy. Pidä peitelasi pari puhtaan pinseteillä .
8

Nuoleskele 4 mikrolitraalysotsyymin liuoksen kanssa mikropipetin , ja lisätään tämä liuos keskelle peitelevy. Vaihtaa pipetin kärjet , ja lisätään 4 mikrolitraasuolaliuosta . Varovasti Pipetoidaan ylös ja alas , joka imee itseensä nestettä niin heitto se , että sekoitetaan suolaliuoksen kanssa lysotsyymiliuosta . Huolehdi sekoittaakahta ilman levittäen nestettä kokopeitelevy.
9

Käännäpeittolasilla yli nopeasti, jottaneste ei pääse liukumaan pois , ja kasvi se tasaisesti huipullahyvin . Huolehdi painaa kevyesti niin se muodostaailmatiivis sinettirasvaa ympärireunathyvin .
10

Painakansi24 - kuoppaisen levyn päällesavi pallot ja jätä levy viileässä paikassa .