Kuivausmenetelmiä pöytäkirja PVDF

Kun sitova nukleiinihappojen tai proteiineja ,korkea sitovalla aineella nimeltään PVDF ( polyvinyl deenidifluoridi ) kalvo tukeevasta-aineita. Western- blottaus , kalvot pinotaan yhteen , joka on valmistettu vasta-aineen , ja sitten kuivattiin . Protokolla kuivauskalvo vaatii tietoa siitä, miten kalvot toimivat , katodilevyissä anodilevyjen ja soveltaminen metanoliliuoksista . Kun oikea protokolla ,kalvo turvallisesti sitoutuuspesifistä vasta-ainetta ja on heti käyttövalmis tai varastointiin . ValmistautuminenKalvo

valmisteluPVDF kalvo puhdistaa ja vakauttaakalvo ennen siirtoa . Ennen kuivausta , kalvo on " estetty" estämään sitova mitään muuta kuinspesifisten nukleiinihappojen , kuten epäspesifinen vasta-aineita. Tämän prosessin aikana , voit märkäkalvo asettamalla se tasaiselle alustalle katettu metanolia . Kalvo vaihtaa väriä aikana tämä lause , läpikuultamattomasta läpikuultava . Kerran valmismetanoli kylpy ,kalvo on sijoitettu deionisoitua vettä liota noin kaksi minuuttia . Kalvo on sitten liota uudelleenmetanoli-liuosta , joka on erittäin hapan.
Assembly of kalvot Ennen Transfer

Kaksi kalvon paperit liotetaanensin metanoli liuos ja asetetaananodilevyn . Tämän prosessin aikana , sinun täytyy huolellisesti tarkistaa ilmakuplia , jotka voisivat vaarantaasiirtoa . Toinen pala suodatinpaperia liotetaan toisen metanoli -liuosta ja asetetaan pinon päälle . Geeli sitten menee päällekalvo , varoen ei jää ilmakuplia välillägeelin sovelluksen ja kalvo . Kolme uutta kappaletta paperia liotetaan sittenkatodi puskuria ja päälle asetettiin geelistä. Jos jokin ilma kuplivaa tapahtuu ,koeputkeen toimii tasoittaakalvoja .
Transfer

Tässä osa prosessia , liität korkea jännite johdotvirtalähteen ja soveltaavakiovirtaageeli aluekalvo 30 minuuttia . Siirto kertaa vaihtelee vasta-aineen tyypistä . 30 minuutin kuluttua , poistatvirtalähteen ja siirto kalvo . Oikeassa alakulmassakalvo leikataan sitten tarkistaa suunta. Kaksi ensimmäistä kerrostasuodatinpaperin heitetään pois , kutengeelin . Bänditmolekyylipaino on merkittykuulakärkikynällä .
Kuivaus

Kun siirto on valmis, kuivakalvo kahdella tavalla . Kuivatuksen nopeuttamiseksi ,kalvo liotetaan 100 prosenttia metanolia ja 10 sekuntia kaiken veden poistamiseksi . Kalvo sitten lepääpala paperia 15 minuuttia . Sillähitaampi kuivaus menetelmä ,kalvo on sijoitettu paperia lisäämättä metanolia . Kun kuivattu ,kalvo saa käyttää tai säilyttää kuivassa astiassa 4 astetta tulevaa käyttöä varten .